Nghiệm thu đề tài “Nghiên cứu ứng dụng công nghệ sản xuất kháng thể đơn dòng để chẩn đoán đặc hiệu bệnh Ca rê”

Gần đây, tỷ lệ mắc bệnh Ca rê ở chó trên thế giới và Việt Nam ngày càng gia tăng, kể cả những con chó được ghi chép đã tiêm phòng vắc xin nhưng vẫn bị bệnh. Điều này làm cho việc tìm hiểu, nghiên cứu, chẩn đoán sớm và chính xác những chó mắc bệnh để có biện pháp điều trị kịp thời là vô cùng quan trọng. Vì vậy, tạo ra được kháng thể đơn dòng sẽ giải quyết được khâu chẩn đoán nhanh và chính xác. Các kỹ thuật dựa trên phản ứng miễn dịch đặc hiệu như hóa miễn dịch tổ chức, hóa miễn dịch tế bào, miễn dịch huỳnh quang thường có giá trị chẩn đoán bệnh rất cao và chính xác. Tuy nhiên, để thực hiện được các kỹ thuật trên, chúng ta cần có kháng thể đặc hiệu với từng bệnh. Hiện tại, trong lĩnh vực thú y, Việt Nam vẫn phải nhập khẩu các loại kháng thể từ nước ngoài với giá thành cao. Mặt khác, thời gian đợi chờ đặt hàng rất lâu, công tác bảo quản, vận chuyển về nước khó khăn do kháng thể luôn yêu cầu điều kiện bảo quản nghiêm ngặt.

Sau 3 năm nghiên cứu, đề tài đã đạt được các kết quả như sau:

Chọn ra 5 chủng virus ổn định về đặc tính sinh học, sinh học phân tử và đại diện cho các địa phương nghiên cứu để phục vụ cho việc chế tạo kháng thể đơn dòng là: CDVHN05P, CDVHY08H, CDVHY07H, CDVND04H, CDVHCM02P. Các chủng virus được lựa chọn tinh chế kháng nguyên có hiệu giá virus cao cho hiệu quả tinh chế tốt và hàm lượng kháng nguyên cao.

Lai tế bào Myolema và tế bào lympho từ lách chuột Balb/c được gây tối miễn dịch. Sau khi nhân dòng 6 dòng tế bào lai, chúng tôi đã thu được 60ml kháng thể đơn dòng. Hoàn thiện và xây dựng được quy trình sản xuất kháng thể đơn dòng Ca rê trong quy mô phòng thí nghiệm.

Tạo ra 5 kháng thể đơn dòng có thể dùng cho phản ứng hóa mô miễn dịch, miễn dịch huỳnh quang, ELISA, hóa miễn dịch tế bào với nồng độ 1 mg/ml ở nồng độ pha loãng từ 10-2 đến 10-3 đều cho kết quả dương tính cao.

Kháng thể đơn dòng sản xuất ra đạt yêu cầu về độ tinh khiết, nồng độ protein dao động trong khoảng 1,4 mg/ml đến 2,5 mg/ml. Kháng thể đơn dòng sản xuất ra và kháng thể thương mại đều cho kết quả tương đương nhau trong các phản ứng miễn dịch đặc hiệu.

Đề tài đã được Hội đồng Khoa học và Công nghệ cấp Bộ nghiệm thu kết quả nghiên cứu xếp loại Khá và đề nghị nhóm tác giả tiếp tục nghiên cứu, ứng dụng kháng thể đơn dòng để sản xuất KIT chẩn đoán, chuyển giao kết quả nghiên cứu vào sản xuất.

Cây sinh học phân tử dựa trên trình tự nucleotide gene H của các chủng virus Ca rê nghiên cứu